miRNA qPCR染料法预混液
产品名称: miRNA qPCR染料法预混液
英文名称: 2× miRNA qPCR Fluore Green Master Mix
产品编号: N132039
产品价格: null
产品产地: 美国
品牌商标: Arcegen
更新时间: 2025-05-20T14:15:52
使用范围: null
规格 | 价格 |
100T(20μL/rxn)-2ml | 250.0 |
500T(20μL/rxn)-10ml | 1200.0 |
- 联系人 : 钟珍
- 地址 : 申江南路4388号1幢2层208室
- 邮编 : 201314
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****6764 点击查看
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- 邮箱 : zhongz@magibagbio.com
- 二维码 : 点击查看
R仪器,无需在不同的仪器上调整ROX浓度。DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶,配合特殊的Buffer体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。
本产品必须与本公司的miRNA一链cDNA合成反转录试剂盒(加尾法,用于qPCR)(Cat#N132068)配套使用,以获得最终的实验结果。
产品信息
货号 |
N132039E |
N132039S |
规格 |
100 T(20 μL/rxn) |
500T(20 μL/rxn) |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
N132036E |
N132036S |
N132039-A |
2×miRNA qPCR Master Mix |
1 mL |
5×1 mL |
N132039-B |
RNase-free H2O |
2×1 mL |
5×1 mL |
储存条件
冰袋运输。-20℃避光保存,有效期1年。
注意事项
1. 使用前,将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
2. 实验时,请尽量使用无污染的耗材,避免污染。
3. 本产品避免反复冻融,配制时应避免强光照射。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 体系配制
(1)将试剂放置室温下融化,使用前上下颠倒,轻轻混匀,并轻微离心后使用,避免起泡。
(2)将试剂置于冰上,按照下表配制试剂。RNase-free H2O可替换为其他用于分子生物学实验的无核酸酶水。
【注】:没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
1) 荧光定量PCR体系配制
组分 |
体积 (μL) |
体积 (μL) |
终浓度 |
2×miRNA qPCR Master Mix |
10 μL |
25 μL |
1 × |
Forward Primer(自备) |
X |
X |
400 nM |
Reverse Primer (10 μM) |
0.8 μL |
2 μL |
400 nM |
cDNA |
X |
X |
- |
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
Up to 50 μL |
- |
【注】:1) miRNA第一链cDNA的加入量不要超过qRT-PCR体积的1/10。高浓度cDNA易导致非特异扩增,可对cDNA适当稀释10-1000倍。2) Reverse Primer (10 μM) 来源于试剂盒N132068。由于专利的保密性,miRNA加A法反转录后,cDNA下游引物序列不同厂商之间存在差异,建议使用试剂盒N132068,以保证最终的实验结果。
2. PCR反应程序设置
可参考以下两个程序进行定量PCR反应。
a. 荧光定量PCR常规扩增程序(两步法)
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
10 min |
1 |
变性 |
95℃ |
15 sec |
35-40 |
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
b. 荧光定量PCR快速扩增程序(两步法)
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
10 sec |
1 |
变性 |
95℃ |
5 sec |
40 |
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
【注】:1)退火/延伸温度和时间可根据实验要求适当调整。2)常规程序与快速程序根据实验仪器选择,例如:ABI QuantStudio 5等仪器可以进行快速程序设置,Bio-Rad CFX96等仪器不可设置快速程序,需要进行常规程序设置。