检测农产品中的单增李斯特菌的前处理方法

引言

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是人畜共患病原菌。李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。WHO 关于单增李斯特菌食物中毒报告中指出: 4% ~8%的水产品,5% ~10%的奶及奶制品,30%以上的肉制品,15%以上的家禽均被该菌污染。由于单增李斯特菌具有严重危害性,农产品中单增李斯特菌的快速检测方法就显得极为重要。

样品制备

菌株的培养与收集

将保存于-70℃的单增李斯特菌CMCC 54004 接种于TSA 平板进行活化,在36℃培养24 h。从上述培养基上挑取单个典型的菌落接种于TSB 中,于36℃, 200r/min 摇床培养24 h,离心收集菌体,无菌水洗涤两次,以4000 r/min 离心5 min,收集菌体细胞。真空冷冻干燥,冻干粉于-20℃保存备用。

空白农产品样品的制备

将黄瓜洗净、去皮,在无菌条件下切成碎末,真空冷冻干燥备用。牛肉洗净,在无菌条件下去除表层部分,切成碎末,真空冷冻干燥备用。2 种农产品按国标法进行检测,证实不含单增李斯特菌。

人工污染单增李斯特菌农产品的制备

吸取适量单增李斯特菌标准株CMCC 54004 菌悬液至无菌农产品碎末中,混匀稀释,取1 g 放入到9mL 灭菌生理盐水的试管中,进行10 倍系列稀释,每个稀释度平行3 个样,营养琼脂平板计数,选择菌落总数在30 ~ 300 之间的稀释度进行计数。最终得到1 g 农产品中单增李斯特菌浓度为1.78×10⁹cfu。将污染单增李斯特菌的农产品真空冷冻干燥,于-20℃保存备用。

恒奥公司可提供的仪器

拍击式均质器

选购拍击式均质器的必要性

上述实验中对黄瓜进行均质，其要求是再无菌条件下，我公司生产的拍击式均质器可以再完全无菌下进行操作，可以保证操作过程中不引入其它菌类，并且所处理样品均具有代表性。

仪器介绍

HBM-400系列均质器是用来将不同的物质进行均质，以获得该物质具有代表意义的样本。该装置简单耐用，只需将样品和稀释液加入 到无菌的过滤器样品袋中 ，然后将样品袋放入均质仪中，关上门即开始和完成样品的处理。该装置可以有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品具有充分的代表性。

主推产品HBM-400B

运行过程

主要特点 

1.运行噪声小和容易操作；

2.可调整的均质时间；固定的或可变的均质速度，可显示拍击板调节间隙的数字显示功能，使处理不同量的样品更明确；

3.为处理微量样品，有可选附件的微量拍击板可更换机构；

4.无菌一次性滤袋，保证卫生和安全；

5.全开启式门，易于清洗；

6.玻璃透明窗口易于观察；

7.样品与均质仪无接触，如无样品泄露则不需进行系统清洗；

8.废液槽以防止样品袋泄漏；

9.为操作者的安全着想，设计有自动停止霍尔开关装置，以防止操作失误夹伤手指。

技术参数