基于 TSA 的 mIHC 技术，能使我们对有限的样本同时检测尽可能多的指标。但 mIHC 实验中抗体配比、实验条件的优化耗时费力。本文整理了 CST 已优化好的 mIHC 实验方案。以靶点为顺序，结合靶点解读和点评，给大家介绍有哪些 CST 优化实验方案可供参考。
——作者按
通过之前的介绍，我带同学们了解到基于 TSA (酪胺信号放大) 技术的多重荧光免疫组化 mIHC，能够帮我们避免体系中多个抗体共孵育带来的干扰，大大方便实验设计；并且能够提供强大的信号放大效果。随后进一步介绍了优化 mIHC 实验的方法，以及一些能帮助更好更快完成实验的一些标准和技巧。
是不是草船和东风都已具备，跃跃欲试的同学们早就迫不及待的撸起袖子干了起来。不少同学做的过程中就发现，其实优化出条件合适的 mIHC 的 Panel 是要花很多功夫的。那么有没有什么简单的方法让小伙伴儿们能快点出 Data 呢?
当！然！有！下面我就带大家盘点一下，任劳任怨的 CST 老（ke）黄（xue）牛（jia）们为大家耕耘好的成果——已经优化好的实验方案（Panel）。如果你正是要用 mIHC 染这些指标，赶紧藏好偷着做吧，别让隔壁组抢发了 Paper !
分别介绍以下已经优化过 mIHC Panel 的靶标：
· Cytokeratin - 细胞角蛋白：上皮细胞源肿瘤标志物
· CD8α– CD8 抗原的活性亚基：效应 T 细胞标志物
· PD-L1：免疫检查点明星配体
· PD-1：免疫检查点明星受体
· B7-H4：免疫检查点配体
· B7-H3：免疫检查点配体
· TIM-3：免疫检查点受体
· LAG3：免疫检查点受体
· CD68：单核细胞/巨噬细胞标志物
· FoxP3： Treg(调节性 T) 细胞标志物
· Arginase-1：MDSC 通过影响环境代谢物参与免疫抑制的关键酶
· HER2：乳腺癌标志物
· 肿瘤标志物：ALK、AR、EGFR、Her-3、Met、PSA、PSMA、ROS1
· T 细胞标志物：CD3e
· 免疫检查点配体：PD-L2
· 免疫检查点受体及配体：VISTA
Cytokeratin - 细胞角蛋白：上皮细胞源肿瘤标志物
细胞角蛋白是主要在上皮细胞表达的中间丝蛋白（一种细胞骨架）。角蛋白表达的组织和分化特异性很高，因此被广泛作为生物标志物 [7]，在研究和病理诊断中用以标识上皮细胞，及恶性上皮肿瘤（Carcinoma）。
CD8α– CD8 抗原的活性亚基：效应 T 细胞标志物
CD8 抗原是细胞表面糖蛋白，在大多数细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）上表达。在 T 细胞上，CD8 是 TCR（T 细胞受体）的共同受体，能和 TCR 一起识别 MHC（主要组织相容性复合体）。活性的 CD8 可以是由两个 α 组成的同二聚体，也可以是由 α 和 β 亚基组成的异二聚体。CD8α 的免疫球蛋白样结构域与 MHC I 类分子的 α3 结构域相互作用， CD8 确保 TCR -抗原相互作用的特异性，延长 T 细胞与抗原呈递细胞之间的接触，并且 α 链能募集 T 细胞活化所必需的酪氨酸激酶 Lck (#2984) [8]。
PD-L1：免疫检查点明星配体
PD-L1，即程序性细胞死亡-配体 1，又称 B7-H1 或 CD274，是调节 T 细胞活化和免疫应答的 B7 细胞表面配体家族的成员。PD-L1 能结合 T 细胞上的 PD-1 跨膜受体并抑制其活化。PD-L1 的表达主要在抗原呈递细胞、活化 T 细胞，以及胎盘、心脏和肺等组织中 [9-11]。另外，PD-L1 在黑色素瘤，卵巢癌，结肠癌，肺癌，乳腺癌和肾细胞癌也有表达 [11-13]，这些肿瘤细胞中 PD-L1 上调能帮助其逃避免疫监视 [14]。
PD-1：免疫检查点明星受体
PD-1，即程序性细胞死亡 1 蛋白，又称 PDCD1 或 CD279，是调节 T 细胞活化和免疫应答的免疫受体 CD28 家族的成员 [15, 16]。PD-1 在活化 T 细胞中表达，能被其配体 PD-L1 和 PD-L2 激活 [10]，进而抑制 TCR 信号传导 [17]。除 T 细胞外，活化 B 细胞和单核细胞中也会表达 PD-1 [18]。PD-1 途径在免疫耐受中起重要作用 [16]，癌细胞也会利用此途径逃避免疫监视 [14]。
B7-H4：免疫检查点配体
B7-H4，又称 VTCN1，是调节 T 细胞活化和免疫应答的细胞表面配体 B7 家族的成员。B7-H4 蛋白在抗原呈递细胞和 B 细胞表达特异性表达，能抑制 T 细胞活化、增殖和细胞因子产生 [19-21]。在几类肿瘤中也发现 B7-H4 蛋白，包括卵巢癌和乳腺癌 [22]。阻断 B7-H4 功能可帮助恢复癌症患者 T 细胞功能，具有潜在的治疗价值 [23]。
B7-H3：免疫检查点配体
B7-H3，又称 CD276，是调节 T 细胞活化和免疫应答的 B7 家族细胞表面配体的成员。B7-H3 是 T 细胞应答的负调节物，能抑制 T 细胞增殖 [24]。B7-H3 主要由抗原呈递细胞，活化的 T 细胞和一些正常组织，包括胎盘和前列腺表达 [25]。在肿瘤中，包括前列腺癌，乳腺癌，结肠癌，肺癌和胃癌以及来自肿瘤相关脉管系统的内皮细胞中可见 B7-H3 的表达 [26, 27]。
