流式细胞术,想说爱你不容易
作者:北京义翘神州科技有限公司 2020-08-19T19:11 (访问量:4872)
且慢,作为一只百折不挠的科研汪,怎能轻言放弃?本汪凭借多年积累的搜索技巧,发现想要了解流式检测,首先可从以下几个方面着手:
一、样品制备
样品制备是影响流式检测分析结果是否准确的关键因素之一。对于流式检测,必须要制备单细胞悬液。在处理不同组织时,应尽可能采用对细胞损伤小、产率较高的单细胞悬液制备方法,最大限度地保持原有细胞特性。另外,流式检测的样品必须是新鲜采集的,液氮冷冻保存或固定处理后的样品都不能用于流式检测分析。
二、荧光素选择
常见的荧光素种类有 FITC(异硫 qing 酸荧光素)、PE(藻红蛋白荧光素)、APC(藻青蛋白荧光素)、PerCP(多甲藻叶绿素蛋白荧光素)以及 Alexa Fluor 系列等。其中最常用的是 FITC,该荧光素较为稳定,由 488m 激光器激发,其发射的荧光信号被第一荧光通道(FL1)接收。PE 也是由 488nm 激光器激发,发射的荧光信号被第二荧光通道(FL2)接收,其荧光信号较强,是 FITC 的 30-100 倍,适用于对弱表达的抗原分子的分析。APC 却是由 635nm 激光器激发,故 488nm 单激光器的流式细胞仪无法分析 APC 的荧光信号。
三、补偿调节
做单色分析时,不需要荧光补偿。但是,当样品用 2 色以上荧光染色时,由于不同荧光素光谱之间存在着互相交叠现象,每一个荧光素在某种程度上都会在「错误」的检测器上显示出信号,为消除这种影响,就需要做荧光补偿。
只知道以上几点,对于流式检测是远远不够的,所以,还要从专业人员那里吸取宝贵的经验。这不,义翘神州将于 2019 年 5 月 16 日 14:00 举办在线讲座《流式细胞术实验精要及其在癌症研究中的应用》,想要早点「爱」上流式的童鞋,点击右侧报名链接,快来报名吧~
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